R300脂質體轉染試劑

  產品簡介：

  增強型轉染試劑是在前幾代轉染試劑的基礎上再次創新，包含最為先進的脂質體納米顆粒技術，追求更優越的轉染性能。增強型轉染試劑具有更好的轉染效率，并提高細胞活性，適用于較難轉染及常見細胞的轉染。

  產品特點：

  1. 更為優越的轉染性能，為較難轉染的細胞系提供了較高的轉染效率;

  2. 對細胞更為溫和，毒性更低;

  3 .較其他轉染試劑具有更高的轉染效率且用量低;

  4.適用細胞更為廣泛。

  操作步驟：(以六孔板的貼壁細胞DNA轉染為例)

  1. 細胞準備。轉染前一天將細胞接種至六孔板內，細胞接種數量視其生長速度和細 6 胞系類型而定，一般為0.5-1×10 個細胞。轉染時要求細胞生長的匯合度為70~90%，轉 染前兩小時對細胞進行換液。(細胞狀態與轉染效果影響很大，選擇最佳的細胞狀態更有利于轉染效率提高和轉染后細胞狀態的恢復);

  2. 將3.75μl和7.5μl的R300-Lipo增強轉染試劑分別加至另外125μl無血清的OPTI-MEM培養基中，輕輕混勻，室溫靜置2-3分鐘;

  3. 將5μg質粒DNA (0.5-5μg/μL) 加入到250μl無血清OPTI-MEM培養基稀釋，制備DNA 預混液勻，然后添加10 μl RZ523-Lipo輔助試劑并充分混勻;

  4. 在每管已稀釋的R300-Lipo增強轉染試劑中加入等體積稀釋的 DNA孵育10-15分鐘;

  5.將DNA和R300-Lipo增強轉染試劑混合液滴加至六孔板的孔內，前后左右晃動孔板混勻，置于培養箱中培養;

  6.轉染18-48小時后，倒置熒光顯微鏡下觀察熒光蛋白表達，或加入抗性培養基篩選穩定表達細胞系單克隆。

  用量參照表：

  1. 轉染siRNA至細胞時，遵循如上所述的DNA實驗方案，但在稀釋siRNA 時不要加入R300輔助試劑。在無血清培養基中制備 DNA-R300-Lipo增強轉染試劑復合物，直接將其加入含細胞培養基的細胞中(有無血清或抗生素均可);

  2. 轉染后無需去除轉染復合物或者更換/添加培養;

  3. 整個實驗過程避免細胞污染，由于不同細胞耐受性不同，我們建議您在做批量實驗前，可根據實際質粒和細胞的轉染效率，分不同梯度量先做預實驗，摸索最佳DNA和R300-Lipo增強轉染試劑的混合比例。步驟里面測試推薦的兩種濃度的并非固定濃度，優化后可根據自身細胞情況調整用量。