儒安生物細胞轉染注意事項

  如為貼壁生長細胞，一般要求在轉染前一日，必須應用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種于培養皿或瓶，轉染當日的細胞密度以70-90%(貼壁細胞)或2×106-4×106細胞/ml(懸浮細胞)為宜，建議在轉染前4h換一次新鮮培養液。

  用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質，無RNA和其他化學物質的污染，OD260/280比值應在1.8以上。

  培養基中的血清

  在開始準備DNA和轉染試劑稀釋液時要使用無血清的培養基，因為血清會影響復合物的形成。其實，只要在DNA-轉染試劑復合物形成時不含血清，在轉染過程中是可以使用血清的。

  培養基中的抗生素

  抗生素是影響轉染的培養基添加物。這些抗生素一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率降低。

  設置陽性對照和陰性對照

  一般在轉染24-48h，靶基因即在細胞內表達。根據不同的實驗目的，24-48h后即可進行靶基因表達的檢測實驗。

  如若建立穩定的細胞系，則可對靶細胞進行篩選，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物，常用的真核表達基因載體的標志物有潮霉素和新霉素等。